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2025-10-23
一、血清的組成與特性血清是血液凝固后分離出的淡黃色液體，其成分復雜且具有動態變化性。主要成分包括：蛋白質類：白蛋白（維持滲透壓）、球蛋白（免疫防御）、纖維蛋白原（凝血功能）及纖維粘連素（促進細胞貼附）。生長因子與激素：成纖維細胞生長因子、神經細胞生長因子、胰島素等，含量雖少但調控細胞增殖與代謝。微量元素與營養物質：鐵離子（由轉鐵蛋白攜帶）、氨基酸、葡萄糖及脂質，支持細胞基礎代謝。其他成分：多胺類、無機物（如鈣離子）及未知因子，其功能仍在研究中。血清成分受供體動物年齡、性別及營...2025-10-16
一、抗原修復不充分原因：甲醛固定導致抗原表位交聯封閉，或修復液pH值錯誤、時間不足。解決：使用pH6.0檸檬酸鹽緩沖液（多數抗體適用）。高壓修復（121℃,2~3分鐘）優于微波修復。二、一抗問題原因：濃度過低、孵育時間過短或抗體失效。解決：進行濃度梯度測試（如1:50~1:400）。設立陽性對照驗證抗體活性。三、組織固定不當原因：固定時間過長（48小時）或固定液濃度過高。解決：推薦10%中性福爾馬林固定6~24小時。及時固定（大標本需切開）。四、操作失誤原因：組織干燥、切片過...2025-09-16
一、抗體使用規范與保存策略1.接收與預處理離心操作：4℃條件下12,000rpm離心3分鐘（體積分裝原則：按單次使用量分裝（≥10μl/份），避免反復凍融導致的活性損失特殊類型處理：腹水抗體需立即凍存（含蛋白酶易降解）熒光標記抗體需全程避光操作2.保存條件優化長期保存：-20℃（普通抗體）或-80℃（珍貴抗體），添加50%甘油可降低凍融損傷短期保存：4℃不超過2周，置于冰箱內層遠離除霜區防腐措施：0.02%疊氮鈉可抑制微生物生長（活細胞實驗禁用）二、重組蛋白使用規范與保存策略...2025-09-12
一、定義細胞裂解（CellLysis）是生物化學和分子生物學研究中的基礎技術，指通過物理、化學或生物方法破壞細胞膜/壁結構，釋放胞內成分的過程。二、裂解機制與原理1.細胞結構特征不同生物細胞具有特異性結構：原核細胞：肽聚糖細胞壁（革蘭氏陽性菌含磷壁酸）真核細胞：磷脂雙分子層膜結構（動物細胞）或纖維素細胞壁（植物細胞）2.裂解作用機制三、標準操作流程1.哺乳動物細胞裂解細胞收集：胰酶消化后離心（300×g,5min,4℃）裂解緩沖液：RIPA緩沖液（50mMTris-HClpH...2025-09-04
在生物實驗中，標準溶液的準確性直接影響實驗結果的可靠性。然而，配置過程中常因操作細節疏忽導致誤差。本文結合生物實驗特點，梳理標準溶液配置的常見問題及規范操作，幫助實驗人員規避錯誤。一、生物實驗標準溶液的特殊要求溶質選擇生物實驗常用標準品（如蛋白質、核酸）需低溫保存，配置前需室溫平衡，避免冷凝水影響稱量精度。酶類標準品需避免反復凍融，建議分裝后使用。溶劑與器皿核酸溶液需使用無RNase/DNase的槍頭、離心管，器皿需高溫滅菌或DEPC處理。蛋白質溶液需避免使用強酸/強堿容器，...2025-08-26
一、血清沉淀物的成因1.脂蛋白變性胎牛血清中的脂蛋白在溫度驟變（如直接-20℃轉37℃解凍）時易發生變性聚集，形成白色絮狀物。研究表明，此類沉淀占解凍后沉淀總量的40%-60%。2.纖維蛋白析出低溫采集的血清殘留纖維蛋白原，解凍時轉化為纖維蛋白，形成肉眼可見的1-2mm絮狀物。該現象在未完-全過濾的血清批次中尤為明顯。3.磷酸鈣結晶37℃環境下磷酸鈣溶解度降低，產生云霧狀沉淀，顯微鏡下呈現布朗運動的黑點，易被誤判為微生物污染。操作因素反復凍融導致脂質聚集熱滅活（56℃以上）引...