一、原理與操作流程

雙抗體夾心法的核心在于利用兩種識別抗原不同表位的抗體：

1.固相抗體包被：將一種特異性抗體固定在固相載體（如聚苯乙烯微孔板）表面，形成固相抗體層。

2.抗原結合：加入待測樣本后，樣本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗體-抗原復合物，洗滌去除未結合物質。

3.酶標抗體結合：加入酶標記的第二種抗體，其與抗原的另一表位結合，形成“固相抗體-抗原-酶標抗體"夾心結構。

4.顯色檢測：加入底物后，酶催化底物產生有色產物，其光密度值與樣本中抗原濃度呈正相關。

二、技術優勢

1. 高特異性雙重驗證

兩種抗體需同時識別抗原的不同表位，顯著降低交叉反應風險。

適用于多價抗原（如蛋白質、細胞因子），可排除單表位干擾。

2. 高靈敏度信號放大

酶標記抗體催化底物顯色，信號強度遠高于直接檢測法。

可檢測低濃度抗原（如pg/mL級），適用于臨床樣本分析。

3. 廣泛適用性

適用于二價及以上大分子抗原（如乙肝表面抗原、腫瘤標志物）。

通過優化抗體對，可檢測多種生物標志物。

三、應用場景

1. 臨床診斷

傳染病檢測：如乙肝表面抗原（HBsAg）、HIV抗體確認。

腫瘤標志物：如甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）定量。

2. 生物研究

細胞因子分析：如IL-6、TNF-α的濃度測定。

藥物開發：抗體藥物效價評估。

3. 食品安全

過敏原檢測：如花生蛋白、麩質殘留篩查。

四、局限性及解決方案

1. 鉤狀效應（Hook Effect）

現象：高濃度抗原導致固相抗體與酶標抗體結合受阻，出現假陰性。

對策：樣本稀釋后復測，或采用一步法優化。

2. 小分子抗原限制

原因：半抗原（如激素、藥物）僅有一個表位，無法形成夾心結構。

替代方案：采用競爭法檢測小分子。

3. 干擾因素

類風濕因子（RF）：可能橋接固相抗體與酶標抗體，導致假陽性。

抗動物抗體（HAAA）：干擾酶標抗體結合。

解決方案：使用抗干擾試劑或優化洗滌步驟。

五、技術比較