固定化酶技術通過物理或化學方法將酶束縛于載體上，使其能重復使用且易于分離。常見的四種方法及其優缺點如下：

1. 吸附法

含義：利用物理吸附力（如范德華力、氫鍵）或離子交換作用，將酶吸附在固體載體（如活性炭、多孔玻璃）表面。

優點：操作簡單、條件溫和，酶活力損失少，載體可重復使用。

缺點：結合力較弱，易受pH、溫度或離子強度影響而解吸附，導致酶泄漏。

2. 共價結合法

含義：通過共價鍵將酶蛋白的非必需側鏈基團（如氨基、羧基）與載體表面的功能基團偶聯。

優點：結合非常牢固，酶不易脫落，穩定性好，可長期使用。

缺點：反應條件較劇烈，可能破壞酶的空間構象，導致酶活性降低。

3. 交聯法

含義：使用雙功能或多功能試劑（如戊二醛）在酶分子間或酶與載體間形成共價交聯網絡。

優點：不使用載體，固定化酶穩定性高，可長期使用。

缺點：反應條件激烈，酶活力損失大，且制備的固定化酶顆粒較小，使用不便。

4. 包埋法

含義：將酶物理包埋在高分子聚合物（如聚丙烯酰胺、海藻酸鈣）的網格或半透膜微膠囊中。

優點：條件溫和，很少改變酶的高級結構，酶活回收率高，適用于大多數酶。

缺點：僅適用于小分子底物和產物，大分子底物擴散受限，反應效率可能降低。