一、操作因素

1.滅菌不徹-底

高壓蒸汽滅菌參數錯誤：溫度、壓力或時間未達標（如121℃未維持15分鐘），導致耐熱孢子存活。

滅菌后冷卻不當：過早打開滅菌鍋或未充分冷卻，引發冷凝水污染。

滅菌物品超載：過多培養基或容器堵塞滅菌鍋，影響蒸汽穿透。

2.無菌操作失誤

超凈臺污染：紫外燈未定期更換、氣流紊亂或操作者動作過大，帶入環境微生物。

操作前未消毒：手部、工具或容器表面未用酒精擦拭，直接接觸培養基。

培養基暴露時間過長：在開放環境中傾倒或分裝，增加污染風險。

三、接種技術問題

接種量控制不當：菌液濃度過高或過低，影響菌落生長密度。

接種工具污染：移液管、接種環未徹-底滅菌或冷卻。

交叉污染：同一工具接種不同菌種，未及時更換或滅菌。

二、環境因素

1.實驗室環境不達標

空氣潔凈度不足：超凈臺HEPA過濾器失效或未定期更換，導致微粒或微生物進入。

溫濕度失控：培養箱溫度波動（如±2℃超出范圍）或濕度不足，影響菌落形態。

氣流干擾：人員頻繁進出、設備振動或空調直吹，導致局部污染。

2.儲存條件不當

培養基未冷藏：液體培養基在室溫下長期存放，引發微生物滋生。

干燥劑失效：固體培養基未密封或干燥劑未及時更換，導致水分吸收或結塊。

三、材料因素

1.培養基質量問題

成分偏差：pH值未校準（如TSA培養基pH應為7.2±0.2）、營養物缺失或過量。

添加劑失效：抗生素、指示劑等未按標準添加或儲存不當。

過期或變質：超過有效期或出現沉淀、變色等異常現象。

2.菌種問題

菌種退化：傳代次數過多或保存條件不當，導致菌落形態變異。

菌種污染：保藏菌種混入雜菌，未做純化驗證。

菌種特性不符：誤用非標準菌種（如用大腸桿菌替代金黃色葡萄球菌）。

四、記錄與驗證因素

1.記錄缺失或錯誤

未記錄關鍵參數：滅菌時間、溫度、菌種稀釋度等未詳細記錄，導致無法追溯。

數據篡改或遺漏：人為修改結果或未記錄異常現象（如培養基變色）。

2.驗證不足

未做陽性對照：未接種標準菌株驗證培養基活性，導致假陰性結果。

陰性對照污染：空白培養基出現菌落，未排查污染源。

五、其他因素

1.設備故障

培養箱溫度失控：傳感器故障或校準過期，導致實際溫度與顯示不符。

滅菌鍋壓力異常：壓力表損壞或未定期校準，影響滅菌效果。

2.人員培訓不足

操作不規范：未掌握無菌技術要點（如火焰滅菌距離、接種環冷卻時間）。

應急處理缺失：對污染或異常結果無明確處理流程。

六、系統性改進建議

標準化操作：制定SOP并定期培訓，確保滅菌參數、接種量等精確執行。

環境監控：定期檢測超凈臺氣流、溫濕度，并記錄校準數據。

材料驗證：每批培養基使用前做性能測試（如無菌檢查、促生長試驗）。

記錄追溯：完善電子記錄系統，確保數據可追溯且防篡改。