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用小鼠elisa試劑盒實驗的雙位點一步法

日期:2014-03-24瀏覽:1491次

    對elisa實驗有了解的朋友們知道,它可以用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三種(固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體、酶作用的底物)必要的試劑,我們根據(jù)試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。
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 在雙抗體夾心法測定抗原時,如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體,則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作,縮短了反應(yīng)時間,如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體,測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中,應(yīng)注意鉤狀效應(yīng),類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當標本中待測抗原濃度相當高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合,而不再形成夾心復(fù)合物,所得結(jié)果將低于實際含量。鉤狀效應(yīng)嚴重時甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
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